血漿中に導入されたNO3-の検出 - 石家荘市イルラーゴデイチーニ有限公司

Scientific Reports volume 12、記事番号: 12525 (2022) この記事を引用

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放電プラズマは種子に活性酸素および窒素種 (RONS) を照射します。しかし、プラズマ照射により種子に導入されたRONSはこれまでのところ検出に成功していない。この研究は、大気圧空気誘電体バリア放電プラズマの照射により、硝酸イオン NO3- が RONS としてレタス種子に導入されるという実験的証拠を提供します。 5分間のプラズマ照射により種子の発芽が促進されます。プラズマ照射したシードの成分をエレクトロスプレーイオン化量子質量分析法（ESI QMS）で調べたところ、プラズマ照射により質量62m/zのイオンが検出可能な量導入されたことが判明した。このイオンは、液体クロマトグラフィー (LC)、多波長検出器 (MWD)、および LC-ESI QMS によって NO3- として同定されました。電子温度 Te = 1 eV、電子密度 Ne = 1013/m3、ガス温度 Tg = 300 K での一次元シミュレーションでは、一酸化窒素 NO を含む NO3− の導入が示されました。 NO3- は、種子に導入されると発芽のためのシグナル伝達を引き起こす最も重要なイオンの 1 つです。走査電子顕微鏡 (SEM) 画像から、プラズマ照射後に種子の表面に変化がないことが明らかになりました。プラズマ照射は、損傷を与えることなく乾式プロセスで種子に NO3- を導入する効果的な方法です。

植物に対するプラズマ照射の生育改善効果は世界的に大きな注目を集めています1,2,3。これまでに、発芽と成長の改善、ホルモンバランスの制御に関する先駆的な研究が行われてきました4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19。種子中のジベレリン酸 (GA) とアブシジン酸 (ABA) の間の研究 20,21、およびプラズマ照射を使用した収穫特性の改善 22。最近、プラズマ照射の生物学的影響の根底にあるメカニズムを解明するために分子生物学的研究が実施されました23。プラズマは、種子に活性酸素および窒素種 (RONS)、光子、イオンを照射し、電場にさらすことができます24。 RONS は、成熟、老化、発芽、その後の苗の成長など、種子のさまざまなプロセスに関与しています 25,26。外因性活性酸素種 (ROS) は、GA 生合成と ABA 異化作用を誘導することにより、Zea Mays および Helianthus annuus の種子の発芽を改善します 27。比色測定とシミュレーションは、種子に導入された RONS の量を推定するのに役立ちます。しかし、プラズマ照射により種子に導入されたRONSはこれまでのところ検出に成功していない。多くの研究がプラズマ照射時の種子における生物学的反応の誘導を扱っていることを考慮すると、その根底にあるメカニズムについての議論は、種子に導入された実際の粒子に基づいて行われるべきである。この研究は、プラズマ照射により硝酸イオン NO3- が RONS として種子に導入されるという実験的証拠を提供します。

私たちは、大気圧空気非熱プラズマの照射により種子に導入される典型的な RONS、NO3- の検出を試みました。外因性 NO3- 投与に対する種子の応答は、植物分子生理学における重要な研究主題です。植物種子中の NO3- は、休眠打破、遺伝子発現制御、シグナル伝達、CYP707A2 プロモーターへの NLP8 結合に起因する ABA 代謝などの応答の誘導に関与しています 28、29、30、31、32。 NO3- の投与による遺伝子型と表現型の変化に関する研究は数多くありますが、NO3- に対する植物の応答の背後にある分子機構は不明のままです 30。したがって、この研究は、プラズマ照射によって NO3- が種子に導入されることを実験的に証明することを目的としました。この導入の考えられるメカニズムも示唆されています。また、プラズマを用いた乾式プロセスで種子にNO3-を投与する新しい方法も提案した。

プラズマ照射による種子への NO3− の導入により食料生産水準が向上する可能性があると考え、工場植物として最も多く栽培されているレタス 33 を生物材料として利用し、急速な社会実装を見据えた。プラズマ技術のこと。図1は、プラズマを1、3、5分間照射した種子と照射していない種子の発芽特性を示しています。この結果は、3 つの生物学的複製を使用して得られました。マークとエラーバーはそれぞれ平均値と標準偏差を示します。 24 時間後、種子は比較的大きな偏差を伴って発芽し始めました。発芽率は、プラズマ照射なし(なし)の種子よりもプラズマ照射あり(あり)の種子の方が常に高く、プラズマ照射が種子の発芽を促進することを示唆しています。この変動はおそらく植物の生存戦略と血漿によって導入されたRONSの量によるものと考えられます。両側検定で、5分間のプラズマ照射を行った種子は、48時間後にプラズマ照射を行わなかった種子のp値(0.027)と比較してp値が69%増加したため、プラズマ照射時間を5分間に決定しました。さらなる実験。

(1、3、5) 分のプラズマ照射なしとありのレタス種子の発芽特性。

エレクトロスプレーイオン化量子質量分析法 (ESI QMS) を使用して、種子内の NO3- を検出しました。図 2 は、(a) 超純水 (ブランク)、(b) プラズマなしのサンプル、(c) 5 分間プラズマ照射したサンプルの MS スペクトルを示しています。ピーク S1、S2、S3、S4、S5、および S6 を図 2a ～ c に示します。これらのピークは超純水中でも観察されるため（図2a）、LC-QMSシステムに由来すると考えられます。図 1b および図 1c のピーク S1 から S6 の強度は、図 2a のものよりも大きくなっています。これは種子汚染物質のマトリックス効果によるものである可能性があります。逆に、M1 および M2 ピークは、図 1b および c では種子抽出物のみに見られ、これら 2 つのピークが種子材料に由来することを示しています。図2bのM1およびM2ピークの強度は図2cのものとほぼ同じであり、血漿なしおよび血漿ありのサンプルの濃度が同じであり、プラズマ照射によって実質的な組成が変化しないことを示しています。 50 ～ 80 m/z の質量範囲内。それにもかかわらず、62 m/z のピーク X (矢印で示す) が図 2c で明確に観察されます。

QMS によって得られた、(a) ブランク、および 20 個の種子の抽出物 (b) プラズマ照射なし、および (c) 5 分間プラズマ照射ありの典型的な MS スペクトル。

5 つの生物学的複製による再現性を評価するために、さらなる実験が行われました。プラズマ照射なしの20個の種子の60〜64 m/z質量領域のMSスペクトルを図3aに示し、プラズマ照射ありのMSスペクトルを図3bに示します。反復ごとに 3 回の測定を実行し、統合値を取得しました。マークとエラーバーはそれぞれ平均値と標準偏差を示します。プラズマ照射なしの 62 m/z での相対強度は 131.96 ± 0.31 で、ベースライン (131) とほぼ同じでしたが、プラズマ照射のある種子では 141.53 ± 1.83 でした。ピーク面積は、血漿照射なしの抽出物よりも血漿ありの抽出物のほうが有意に高かった（両側 t 検定による p = 0.00012）。これらの結果は、プラズマ照射によって生成された 62 m/z 分子がシードに導入されたことを強く示しています。スケーラブル誘電体バリア放電 (SDBD) プラズマの発光スペクトルが NO (200 ～ 250 nm)34 を示すことを考慮すると、ピーク X の主な候補は空気プラズマ中の長寿命種の中でも硝酸イオン (NO3-) です。 NO3− は、反応 (R1) ～ (R7) に示すように、気相での N2、O2、および H2O の電子衝撃イオン化反応から生成できます35。

20 個の種子の抽出物の 60 ～ 64 m/z の MS スペクトル (a) プラズマ照射なし、(b) 5 分間プラズマ照射あり、QMS モードで取得。 3つのショットが統合されました。マークとエラーバーはそれぞれ 3 回の平均値と標準偏差を示します。

液体クロマトグラフィー (LC) - 多波長検出器 (MWD) および LC-ESI QMS を使用して、62 m/z ピークを特定しました。クロマトグラフィーは、種子抽出物中の酵素、タンパク質、有機金属などの不純物からの NO3- 量を測定するのに有効です。硝酸イオンは約 224 nm の波長を吸収し、その等吸収点は 215 nm です36。種子抽出物中の 228 nm で吸収されるタンパク質のペプチド結合による干渉を避けるために、MWD には 210 nm の波長が使用されました 37。 NO3- はプラズマ照射水に含まれる主要なイオンであることが報告されています 1,38。したがって、超純水にもプラズマを照射して分析に使用しました。図 4 は、(a) ブランク (超純水)、(b) 1 μM の NO3- 標準溶液、(c) プラズマ照射なしの超純水、(d) 超純水の 210 nm での MWD クロマトグラムを示しています。プラズマ照射を行った水、(e) プラズマ照射を行わなかった種子抽出物、(f) プラズマ照射を行った種子抽出物。 2 分以内に観察された乱れは噴射ショックによるものであるため、無視されます。図 4a では、ブランク (種子抽出の準備に超純水を使用) では 2 分後のピークが示されていません。標準試薬 NO3- の希釈には超純水を使用しました。図4bに示すように、NO3-に対応するピークがMWDの5.84分に現れます。図4cにはNO3−のピークはありませんが、図4dとfでは強度の高いピークが見られ、プラズマ照射により超純水と種子にNO3−が導入されたことがわかります。プラズマ照射なしの種子でも小さな NO3- ピークが観察されました。図4eおよびfに示すように、種子抽出物には3〜5分にいくつかのピークがあり、これらのピークの面積はほぼ同じですが、NO3-ピーク面積は互いに大きく異なります（つまり、81.05と1486.04）。それぞれ血漿なしおよび血漿なしの場合。ランバート・ビールの法則によれば、プラズマ照射を受けた種子の抽出物中の NO3- の量はかなり多いと考えられます。しかし、プラズマ照射によりシード内にイオンが生成され、このイオンが NO3- と同じ保持時間で約 210 nm の UV を吸収した可能性があることは否定できません。したがって、図 1 と 2 の結果に対応する LC-ESI QMS 実験を実行しました。 2、3、4。

(a) ブランク、(b) 濃度 1 μM の NO3- 標準溶液、超純水、(c) プラズマ照射なしおよび (d) 300 秒間のプラズマ照射ありの 210 nm の MWD クロマトグラム、および種子抽出物(e) プラズマ照射なし、(f) 5 分間プラズマ照射あり。

分析対象の分子の同位体分布はその構造に固有であり、検出された質量を示す同位体を特定するのに非常に効果的です。安定同位体は窒素原子と酸素原子のそれぞれに存在するため、NO3- の割合は同位体分布計算ツール (Agilent MassHunter Workstation Data Analysis Core、バージョン 10.0) を使用して計算されました。これを使用して、NO3- に関して主に検出される質量を推定できます。計算値は、質量の 61.99 m/z、62.99 m/z、63.99 m/z、64.99 m/z で、それぞれ存在量の 98.91%、0.47%、0.61%、0.00% に相当し、約 99% であることを示しています。自然界に存在する NO3- の質量は 62 m/z になります。したがって、62 m/z の NO3- を同定するために、NO3- の標準試薬とプラズマ照射種子の抽出物について 62 m/z のクロマトグラムが得られました。 QMS の質量分解能は 1 m/z 以内でした。これらの保持時間の一致は、それらが同じ物質であることを強く示しました。抽出イオンクロマトグラム（EIC）は高濃度で信号強度が飽和しますが、MWDに比べて少量の物質を検出できます。図 5 は、(a) ブランク、(b) 1 μM の NO3- 標準溶液、(c) プラズマ照射なしの超純水、(d) プラズマ照射ありの超純水、(e) シードの 62 m/z の ESI を示しています。 (f) プラズマ照射なしの種子抽出物。図 5 は、希釈プロセス内の汚染と濃度変動を排除するために、図 4 に示したものと同じサンプルから得られました。図1および2に示すように、ブランクにはピークがありません。 5aと4a。図 5b に示すように、標準試薬は 5.8 ～ 6.3 分の保持時間でピークを示しました。図 5c と d は、それぞれプラズマを含む超純水とプラズマを含まない超純水を示しています。プラズマ照射中、石英シャーレに超純水を入れた。図5cに示すように、単に石英シャーレに置いた超純水（照射なし）ではピークが現れませんが、同じサンプルにプラズマを照射すると、保持時間5.8〜7.0分に大きなピークが現れます。、図5dに示すように。この保持時間は標準試薬と同じ範囲でした。したがって、プラズマ照射により得られた 62 m/z イオンは NO3- であると同定されました。種子抽出物の場合、図5eおよびfに示すものと同じ保持時間領域でピークが見つかり、プラズマ照射前にNO3-が種子中にすでに存在していたことを示唆しています。その量はプラズマ照射により増加した。種子抽出物の平均ピーク面積の標準偏差 (±) は、プラズマ照射ありおよびなしで、それぞれ 4.6 × 103 ± 660.5 および 3.9 × 104 ± 4154.9 でした。統計的 t 検定では、p = 0.0006 であることが示されました。 NO3-がプラズマ照射によって種子に導入されたことは明らかですが、プラズマ照射前にNO3-が検出可能なレベルで種子中にすでに存在していたことも興味深いです。この方法は、未処理の種子にもともと存在する NO3- の量を測定するのに役立つ可能性があります。

(a) ブランク、(b) 濃度 1 μM の NO3- 標準溶液、超純水、(c) プラズマ照射なしおよび (d) 5 分間プラズマ照射した 62 m/z の EIC、および抽出物の EIC (e) プラズマ照射なし、および (f) 5 分間プラズマ照射ありの種子。

大気圧での空気 SDBD プラズマ照射による種子への NO3- 導入の実現可能性は、Sakiyama et al.39 によって要約された 624 の生成および分解反応方程式を用いた COMSOL を使用した 1D シミュレーションによって評価されました。ここで、電子温度 Te = 1 eV、電子密度Ne = 1013/m3、ガス温度 Tg = 300 K、プラズマ幅 Lp = 0.1 mm、持続時間 1000 秒。シミュレーション結果は、シード位置に対応するプラズマ領域から 5 mm 離れた点での NO3- の密度とその生成に関与する反応種の密度を示しています。表 1 は、特定の点、たとえば 1000 秒後に SDBD 電極の下に置かれたシードにおける、NO3- および以下の反応を通じてその生成に関与する反応種の密度のシミュレーション結果を示しています39、40、41、42。

上記の反応に対応する速度定数の単位は (m3/s) です。表 1 は、NO3- が種子に直接輸送され、同時にその生成に関与する反応種 (NO、NO2、NO2-、NO3、HNO3、HNO2、N2O5 など) が輸送されることを示しています。ＤＢＤプラズマはストリーマ放電を伴う。初期 DBD プラズマの減少した電場 E/N は約 100 Td で、典型的なストリーマチャネルの電場 E/N は < 30 Td43 です。この状態では電子温度 Te < 2.7 eV となり、この電子は主に大気圧空気中の N2 や O2 の振動励起に消費されます。 N2 と O2 の振動状態は、一般にゼルドビッチ機構として知られる次の反応を通じて NO の生成に寄与します 44。活性化エネルギー Ea と反応エンタルピー ΔH は両方とも、R20 ではほぼ 3 eV/mol、R21 ではそれぞれ 0.3 eV/mol と - 1 eV/mol です。

したがって、表 1 では NO が最も高い密度 (6.6 × 1018/m3) を示します。高密度の NO は種子内の H2O と反応する可能性があります。 Lukes らによると、NO は次の反応によって NO3- につながります 45。

この研究で使用したレタス種子の平均重量 ± 標準偏差は、種子あたり約 0.8 ± 0.04 mg でした (n = 8)。 1,250 個を超える種子の水分含量を測定したところ、4.705 ± 0.503 wt% (n = 4) であることがわかりました。これらの平均値を使用して、シード内の水分子の数 \({n}_{\mathrm{H}2\mathrm{O}}\) が式 3 によって導出されます。 (1):

ここで、\(w\) は種子内の H2O の重量 (37.64 µg/種子)、\({N}_{\mathrm{A}}\) はアボガドロ定数 (6.022 × 1023/mol)、\ (M\) は H2O モル質量 (18 g/mol) です。種子面積は 0.393 ± 0.00374 × 10-6 m2 (n = 290) であり、種子の体積は、厚さを 1 mm と仮定して 0.393 × 10-9 m3/種子と算出されました。シード中の NO \(({n}_{\mathrm{NO}})\) と H2O (\({n}_{\mathrm{H}2\mathrm{O}})\) の体積はそれぞれ2.594×109と1.259×1018。 NO が種子内で H2O と反応すると、R22 に示すように、2 分子の NO と 1 分子の H2O が消費されて NO2- と NO3- が生じます。したがって、NO が H2O と完全に反応したとしても、十分な量の H2O が種子内に残ることになります。安定した（O2 および H2O）豊富な環境における NO の高密度を考慮すると、プラズマ照射による種子への NO3- の導入経路は主に反応（R22）に関与していると結論付けられます。一方、Sakiyama et al.39 によれば、NO2- は NO と反応し、以下の反応により NO- と NO2 を生成する46。

NO−はM、O2、NOと反応し、以下の反応によりNO、O2−、eを生成します47。

R22にはNOが関与しています。 O2− は N2 および O2 と反応し、以下の反応により e を生成します41。

電子 e は NO および O2 と反応し、以下の反応により NO- および O2- を生成します 39,41。

NO- と O2- はそれぞれ R24-26 と R27, 28 の反応に関与します。

図 2 と 4 は、プラズマ照射が種子の定性的組成に影響を与えなかったことを示唆しています。したがって、種皮の表面状態に対するプラズマ照射の物理的影響を、走査型電子顕微鏡 (SEM) 画像を使用して調査しました。図 6 は、(a) プラズマ照射前と (b) プラズマ照射後に得られた典型的な SEM 画像を示しています。観察面はプラズマが照射された側である。種子にプラズマを 10 分間照射しました。これは、質量分析のための種子のコンディショニング期間の 2 倍の長さです。レタスの種子は、種皮としての果皮と呼ばれる外層と、内部小器官としての外皮、胚乳、胚から構成されています48。図6aに示すように、この研究で使用した種子では典型的な果皮が観察されました。図6bに示すように、果皮はプラズマ照射後も無傷のままでした。それは、炭水化物ポリマー (セルロース、ヘミセルロース、ペクチン) と構造タンパク質のネットワークからなる複雑で動的な細胞外マトリックスで構成されています 48。プラズマによって生成される O3 などの化学種は、レタスの種子に含まれる不飽和脂肪酸を含むアルケン 49 の炭素間二重結合 (C=C) を開裂または二量体化し、その後 C=C が失われる可能性があります。ラマン分光法は、プラズマ照射による種子のこのような化学的損傷を評価するために使用されました。血漿なしのレタス種子の980〜1970 cm−1での典型的なラマンスペクトルを図S1に示します。リグニンとフラボノイドに割り当てられる C=C ピークに対応する 1609 cm-1 のピークを見つけることができます (図 S1)。

同じ種子の SEM 画像 (a) プラズマ照射前、(b) 10 分間のプラズマ照射後。

ラマン分光法により、リグニンとフラボノイドに割り当てられた炭素-炭素二重結合（C=C）ピークは、5分間および10分間のプラズマ照射後も変化しないことが明らかになりました（図S2）。血漿によって生成される O3 などの化学種は、レタス種子中の不飽和脂肪酸を含むアルケン 49 の C=C を開裂または二量体化し、その後 C=C が失われる可能性がありますが、そのような影響は検出できません。これらの結果は、プラズマ照射により種子に化学的または物理的損傷を与えることなく NO3- を導入できることを示唆しています。

本研究では、プラズマ照射により乾燥レタス種子に混入したNO3-をLC-ESI QMSを用いて検出する手法を開発した。現在まで、気相および溶液中の RONS の量のみが評価されています。処理された種子から血漿導入された RONS が検出されたのはこれが初めてです。外部から導入された NO3- に対する種子の細胞応答の分子機構はまだ研究中であるため、NO3- は種子の生理学の観点から依然として最も重要な分子の 1 つです 30。これまでのところ、種子に NO3- を外部から投与する唯一の方法は、種子を KNO3 溶液に浸すことでした。しかし、プラズマを使用すると、水や対イオンを必要とせずに NO3- を導入できます。プラズマ照射により種子に導入される NO3- の量を定量的に評価することは、植物分子生物学へのプラズマ科学の貢献と、プラズマ照射による発芽誘導機構の定量的な議論において決定的です。

レタス種子 (Lactuca sativa L.) は日本のアサヒファームから購入しました。植物材料の実験使用はアサヒファームの許可を得て行われました。シードには、スケーラブル誘電放電 (SDBD) 電極 21 を使用してプラズマが照射されました。この研究で使用されたプラズマの特性については、以前の論文で説明されています9。プラズマ照射は、５５％Ｒｈを使用して２４℃で実施した。 NO3- 検出では、80 個のレタス種子を 1 回のプラズマ照射で同時に照射しました。 0、1、3、5分のプラズマ照射時の種子の発芽特性に基づいて、照射時間は5分と決定されました。発芽試験は、シャーレ内のペーパーフィルター上に播種した 30 個の種子を用いて、水道水 3 mL を用いて、22 °C の恒温槽内で毎日 12 時間の明暗サイクル下で実施しました。発芽した種子の数を、48 時間の吸水後 12 時間ごとに数えました。発芽率は、発芽した種子の数をペトリ皿内の種子の総数で割ることによって計算されました。すべての方法は、関連するガイドラインおよび規制に従って実行されました。

20 個の種子を使用して、以下の手順で種子抽出物サンプルを取得しました。種子を 2.0 mL チューブ (Eppendorf) 内で自動粉砕機を使用し、2800 rpm で 3 分間ビーズで粉砕しました。種子抽出は、粉砕サンプルをサンプル 1 mg あたり 50 μL の超純水とともに暗条件下、室温で 120 分間振盪することによって実行されました。種子抽出物をメンブランフィルターを使用して濾過し、粒子を除去した。

ESI QMS (G6470A、Agilent) を使用して、70% H2O/30% アセトニトリル中の 3.75 mM 酢酸アンモニウムの移動相で種子内の NO3- を検出しました。移動相プロファイルは、ESI QMS の場合は 0.2 mL/分、LC-ESI QMS の場合は 0.4 mL/分でした。注入量は5μLでした。イオン化は、キャピラリー電圧 4000 V、ターボガス温度 300 °C の ESI のネガティブモードで実行されました。および 50 V のフラグメンタ電圧。同定と定量分析には、LC (G7116A、Agilent) – MWD (G7165A、Agilent) を含む Agilent Infinity II を使用しました。 LC用カラムにはAcclaim Trinity (P1、Thermo Fisher)を使用しました。サンプルの希釈には LC グレードの超純水を使用しました。標準試薬NO3-は富士フイルム和光株式会社より購入しました。

1D 数値モデルは、多目的シミュレーションソフトウェアである COMSOL Multiphysics 5.4 を使用して開発されました。私たちの以前の研究で説明したように、電子はプラズマ領域に 1015 m-3 の一定の数密度で存在します。種子の表面に垂直な x 方向 (5 mm) のみの粒子分布を考慮しました。 Te = 1 eV、Tg = 300 K と仮定しました。シミュレーションでは、H2O、O2、および N2 の割合はそれぞれ 0.01、0.21、および 0.78 でした。以前の記事で述べたように、この種には 10−5 m2/s の係数値が使用されました 39。反応種の拡散を決定するために、シミュレーションを 1000 秒間実行しました。すべての反応経路と速度定数は、Sakiyama et al.39 の研究から引用しました。

走査型電子顕微鏡 (SEM) 画像は、放出電流 93 μA、加速電圧 15 kV の Hitachi S-3400 N を使用して取得されました。

現在の研究中に使用および/または分析されたデータセットは、合理的な要求に応じて責任著者から入手できます。

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SEM をご提供頂いた九州大学電気情報科学院小野寺武教授に感謝いたします。また、技術的なご支援とご激励を賜りました竹内望教授に感謝いたします。この研究は、QR プログラム (Qdai-jump Research Program) 01255 および日本学術振興会 (JSPS) の科研費 JP20H01893、JP19K14700、および JP22K03586 の支援を受けました。さらに、この研究は、科学技術振興機構 (JST) のターゲット駆動型研究開発による適応的かつシームレスな技術移転プログラム (A-STEP) によって部分的に支援されました。、JP19H05462、JP21H04451、JP20K14454、プラズマバイオコンソーシアム、名古屋大学低温プラズマ科学センター。

九州大学電気情報科学院（〒819-0395 福岡市）

Takamasa Okumura, Kunihiro Kamataki, Naoto Yamashita, Naho Itagaki, Masaharu Shiratani & Kazunori Koga

九州大学プラズマナノ界面工学研究センター、福岡市、819-0395

Pankaj Attri & Yuichi Tsukada

九州大学農学部、〒819-0395 福岡県

Yushi Ishibashi

東京理科大学理工学部応用生物科学科、〒278-8510 千葉県

Kazuyuki Kuchitsu

自然科学研究機構新規科学研究センター、〒105-0001、東京

Kazunori Koga

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TO と K.Koga は研究を設計し、サンプルを準備して特性評価し、原稿を書きました。 TOは実験を行いました。 TO、K.Koga、AP、K.Kamatakiが化学反応シミュレーションについて議論しました。 TO、K.Koga、YT、YI、K.Kuchitsu は硝酸イオン導入の生物学的意義について議論しました。 TO、K.Koga、NI、NY、MS は気相での化学反応について議論しました。 TO、K.Koga、AP、MS は原稿の構成について話し合いました。

Correspondence to Takamasa Okumura.

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

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転載と許可

奥村哲也、アトリ P.、鎌滝和也他液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化量子質量分析法 (LC-ESI QMS) を使用した、プラズマ照射された乾燥レタス種子に導入された NO3- の検出。 Sci Rep 12、12525 (2022)。 https://doi.org/10.1038/s41598-022-16641-1

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受信日: 2022 年 3 月 26 日

受理日: 2022 年 7 月 13 日

公開日: 2022 年 7 月 22 日

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-022-16641-1

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