非成人における神経管閉鎖不全の新たなモード
ホームページホームページ > ニュース > 非成人における神経管閉鎖不全の新たなモード

非成人における神経管閉鎖不全の新たなモード

Oct 20, 2023

Scientific Reports volume 5、記事番号: 16917 (2015) この記事を引用

2055 アクセス

13 件の引用

メトリクスの詳細

この記事に対する著者の訂正は、2022 年 3 月 30 日に公開されました。

この記事は更新されました

神経管の閉鎖に失敗すると先天性欠損症が生じ、その重症度は二分脊椎症から致死性の無脳症にまで及びます。 ヒトにおける神経管欠損の遺伝的危険因子はほとんど知られておらず、母親の糖尿病など環境的危険因子の重要な役割が浮き彫りになっています。 しかし、母体の代謝の変化が胚の発育、特に神経形成にどのような影響を与えるのかはよくわかっていません。 我々は、神経管欠損の病因の根底にある形態形成基盤として、原条における新生中胚葉細胞の遊走障害を特定する、糖尿病妊娠の2つの独立したマウスモデルからの証拠を提示する。 我々は、原腸形成の乱れは神経形成異常を説明するだけでなく、糖尿病妊娠における広範囲の先天奇形の統一的な病因を提供すると結論づけた。

神経管を閉鎖しないと先天性欠損症が発生し、その重症度は無症候性の隠れ二分脊椎症や外科的に矯正可能な二分脊椎症から、外脳症や無脳症などの致死的な状態まで多岐にわたります。 マウスでは、突然変異が神経形成欠損を引き起こす、または神経形成欠損の一因となる遺伝子が約 400 個同定されています 3,4。 対照的に、ヒトでは比較的少数の遺伝的危険因子が知られており5、葉酸欠乏症6や母親の糖尿病7、8、9、10などの環境的危険因子の重要な役割が強調されています。 しかし、食事からの葉酸供給が改善され、血糖コントロールが改善されたにもかかわらず、神経管欠損(NTD)の発生率は部分的にしか減少していません11,12。 神経管欠損のリスクが存在するため、環境要因が一般的に胚の発育、特に神経形成にどのような影響を与えるのかをより深く理解することが求められています。

非肥満糖尿病 (NOD) 系統のマウスは、自然に自己免疫性糖尿病を発症する傾向があり、ヒト I 型糖尿病の確立されたモデルです 13,14。 糖尿病性 NOD 妊娠の胎児は、糖尿病催奇形性のもう 1 つの特徴である神経管欠損 (NTD) および心臓欠損 16,17 を非常に高い割合で患っています。 今回我々は、NOD 糖尿病母動物における受胎前からのフォリン酸補給により、NTD 発生率が 40.2% から 21% に減少したことを報告する(p = 0.006、補足図 1)。 したがって、ヒトの妊娠と並行して、このモデルの NTD は部分的に葉酸応答性になります。

予想外なことに、高血糖のNOD母動物からの胚では、神経板の前後軸に沿ったさまざまな場所に突出する異所性組織が表示されることがわかりました(図1a〜f)。 突起は糖尿病妊娠に厳密に限定されており、妊娠 8.5 日 (E8.5) の胚の 25.3% で発生しました。 突起が NOD 株に特有のものであるかどうかをテストするために、FVB 株の雌にストレプトゾトシン 18 を用いて高血糖を誘発したところ、NTD 発生率は 21.6% 19 となりました。 E8.5では、高血糖にさらされたFVB胚の12.9%が突起を示しました(図1g、h)。 全体的な外観、前後軸に沿った位置、および突起の内部組織(図1k)は、露出したNOD胚の表現型と驚くほど類似していました。 したがって、これらの奇形は NOD 株の遺伝的背景の特異性ではなく、両方の実験モデルに共通する重度の母親の高血糖 (補足表 1) から生じます。

糖尿病妊娠による胎児の神経板突出表現型。

(a) から (d) は、一般に尾側の位置に突起 (三角形) を持つ NOD 株の糖尿病性妊娠からの胚です。 (e)、後脳レベル、神経管閉鎖前部の吻側に突起のあるNOD胚。 側面図。 挿入: 胚の背面の図。 (f)、2 つの突起を持つ NOD 胚: 中央/前脳領域にある小さな突起と体幹領域にある大きな突起。 挿入: 影響を受けていない神経板領域 (上) と影響を受けた神経板領域 (下) の仮想セクション。 影響を受けていない領域と比較すると、突起の影響を受けた領域は、正中線の隆起を除いて全体的に正常な組織を示しています。 この隆起は、神経上皮に類似し、神経上皮に隣接する外層と、細胞核がまばらなコアを備えています。 (g、h)、FVB 株の糖尿病妊娠からの胚は、NOD 株で観察されたものと同様の突起を示します。 パネル g の胚には、そのような奇形が 2 つあります。1 つは将来の後脳の尾側端にあり、もう 1 つは尾側幹領域にあります。 (i – k)、DAPI で染色された胚全体の共焦点イメージング データの 3 次元再構成から得られた画像。 (i)、パネル e と同じ胚。体積データから計算された表面 (紫色) で示されています。 後脳レベルの突起がはっきりと識別できます。 (j)、「オープンブック」プレゼンテーションにおける仮想傍矢状断面の 2 つの側面。 突起は神経上皮と隣接しており、コアは間葉系の特徴を思わせる低密度の DAPI 染色細胞核を示しています。 (k)、パネル h に示されている FVB 胚の「オープンブック」プレゼンテーション。 突起の形態学的外観は、糖尿病に曝露された NOD 胚と FVB 胚で類似しています。

2光子共焦点顕微鏡によるイメージング、光学切片からの胚全体の3次元再構成(図1i)、およびその後の単一平面ビューの生成により、突起と胚の間の接合部をより詳しく検査することができました(図1j、k) )。 我々は、外層が神経上皮に似た突起と神経板との間に隣接性を検出した。 突起の中心はより低い細胞密度を示し、間葉の特徴を思い出させた。 これは、突起が神経上皮細胞だけで構成されているわけではないことを示唆しています。

突起の起源を決定するために、3' 発現タグ配列決定を使用して、FVB モデルから顕微解剖した突起組織に対して遺伝子発現プロファイリングを実行しました。 比較のために、閉鎖部位1のすぐ前で開いた神経管をレーザー顕微解剖しました(補足図2a〜c)。 Noto 遺伝子発現の分析により、神経管サンプルには潜在的に汚染されている脊索がないことが示されました(補足図 2d–h)。 開いた神経管と比較して突起で統計的に有意な差次的発現を持つ799個の遺伝子を特定し(図2a、補足図2j)、選択した遺伝子の定量的RT-PCRによる配列決定に基づく観察を確認しました(図2b)。 階層的クラスタリングにより、突起と開いた神経管の間の発現プロファイルの明確な区別が実証されました(補足図2i)。 突起で主に発現する 570 個の遺伝子の注釈は、GO 用語「中胚葉形成」および「中胚葉発達」について大幅に充実していました。

神経板突起の分子解析。

(a) トランスクリプトーム プロファイリングは、AB SOLiD 5500XL 次世代シーケンサーの 3' 発現タグ シーケンシング (SAGE) によって実行されました。 DESeq を使用して、3 つの個別の突起 (n = 3) と 4 つの胚 (n = 4) の開いた神経管神経上皮の比較を行いました。 データは火山プロットとして表示され、統計的有意性は発現比 (突起対神経管) に対してプロットされた –log10(padj) として表されます。 灰色は統計的有意性に達しなかった遺伝子を表します (Benjamini-Hochberg 補正)。 赤いラベルは、突起における発現の蔓延を示す遺伝子を示します。 これらの遺伝子のうち、青色は中胚葉の発生において既知の役割を持つ遺伝子を示します。 緑色は開放神経管に蔓延している遺伝子を示し、オレンジ色は目的の 2 つの遺伝子を示します。 パラダイムの片側で発現が完全に欠如している遺伝子は、10 または -10 のいずれかの log2 でプロットされました。 (b) 定量的リアルタイム PCR による、選択した遺伝子の発現差の検証。 突起に蔓延する 8 つの遺伝子 (Acvr1b、Dll3、Mixl1、Nodal、Noto、T、Tbx6、および Wnt3a) が検証用に選択され、開放神経管で優勢に発現する 2 つの遺伝子 (Fgfr2、Zic1) が検証用に選択されました。 配列決定データが得られたのと同じサンプルが分析されました。 したがって、我々は、3 つの突起のそれぞれについて 4 つの技術的複製で、および 4 つの神経上皮サンプル (4 つの個別の胚から) についてそれぞれ 4 つの技術的複製で遺伝子発現レベルを測定しました。 バーは、突起と神経管との間の発現比をlog2で表したものを表す。 t 検定における統計的有意性は星印で示されます。 配列決定実験から得られた発現比は、Nodal を除くすべての候補遺伝子について確認されました。Nodal は発現差の予想された方向を示しましたが、統計的有意性には達しませんでした。

これらの遺伝子のうち 85 個について、タイラー期 11 ~ 13 (在胎日 E7.5 および E8.5 に相当) での発現パターンが以前に報告されています (MGI、http://www.informatics.jax.org/): 22遺伝子は神経外胚葉と中胚葉で発現されることが知られており、33 個は中胚葉に限定され、10 個は節で発現され、28 個の遺伝子は原条で発現されます(補足表 4)。 これらの結果は、突起には中胚葉が含まれており、それらが突起を原腸形成中に活動する分子ネットワークに結び付けることを示しています。突起には、Nodal や Furin など、初期の原腸形成に関与することが知られている遺伝子(Nodal の活性化に必要な 20 および原腸形成に関与する成分)の発現が特徴的でした。 Fgf8、Wnt3a、T/brachyury などの原始線条 21 の維持。 また、Cdx2、Axin2、Lef1などのTの標的と、T22、23によって駆動される制御ネットワーク内の57の遺伝子、およびCdx222の153の下流標的も検出しました(補足表5)。 これらには、既知の軸方向、近軸方向、および側方中胚葉マーカーが含まれます。 これらの調節ネットワークの存在は、突起内の間葉細胞が現在知られている中胚葉特定プログラム全体を受けていることを示しています。

E8.5でのin situハイブリダイゼーションによるNOD胚の分析(図3)により、自然発生的に開始される母親の高血糖と化学的に誘導された母親の高血糖からそれぞれ生じる突出との間の類似性が明らかになった。 胚盤葉上層/神経系譜 24 のマーカーである Sox2 は突起の外層全体に存在し、一方、原条および発生期中胚葉 25 のマーカーである T は突起の近位コアまで伸びていました。 コミットされた中胚葉のマーカーである Tbx6 24,26 は、中胚葉翼の原条および遊走細胞で見つかりました。 突起の中心における Tbx6 の発現は、適切な中胚葉の発達を思い出させます 27: T の発現がすでに消失している場所での発現が最も強かったです。 全体として、これらのデータは、中胚葉細胞の移動が完全にブロックされておらず、突起周囲で局所的に障害されていることを示しています。

神経板突出の組織学的分析。

(a) Theiler ステージ 11 のマウス胚の概略図 (http://www.emouseatlas.org/)。 黒い線は、パネル (c ~ e) に示されている断面の切断面を示します。 色: 紫 - 胚の外胚葉と中胚葉。 コガモ - 羊膜と尿膜。 青 - 内胚葉と卵黄嚢。 黄色 – 落葉。 (b) 突起のあるマウス胚の表現 (赤)。 黒い線は、突起を通る、吻側から尾側の順序でパネル (フィート) に示されている断面の一連の切断面を示します。 (c) Sox2 のプローブを用いた in situ ハイブリダイゼーション後の、タイラー期 11 の正常血糖 NOD 妊娠からの胚の後部領域の断面図。 Sox2 シグナルは胚盤葉上層/外胚葉層に限定されます。 点描線は胚の境界を表します。 (d) 隣接する切片を T のプローブで染色し、原条および移動中の新生中胚葉における T 発現を明らかにしました。 ( e )Tbx6のプローブで展開した隣接切片は、原条の中内胚葉層および中胚葉翼におけるTbx6発現を示しています。 (ft) 突起を特徴とする、タイラー期 11 の糖尿病性 NOD 妊娠からの胚の一連の隣接する切片。 パネル (f) は突起の最初の吻側の側面を示し、パネル (t) はシーケンスの最も尾側のセクションを示します。 (f、i、l、o、r)、突起の外層で検出される Sox2 発現について調べられたセクション。 (g,j,m,p,s)、T の発現を示す同じ胚からの隣接切片。吻側では、原条を思わせる領域の突起の基部に T が検出されます。 突起の中心(パネル(m))では、コアだけでなく外層にもTが発現しています。 (h、k、n、q、t)。 隣接する切片をTbx6の発現について調べた。 Tbx6 は突起のコアで顕著に検出され、外層には存在しません。 中胚葉翼における Tbx6 の存在は、T の発現がすでに停止しているドメインでのこの遺伝子の正常な発現を表します。

突起内の異所性中胚葉は、新たに生成された中胚葉細胞の増殖の変化、または発生期の中胚葉の方向性の乱れた移動によって生じる可能性があります。 組織学的分析は2番目の可能性を支持しています。有糸分裂マーカーであるホスホヒストン3の染色では、胚の残りの部分と比較して突起の濃縮が示されなかったため、細胞増殖の増加の証拠は見つかりませんでした。 代わりに、突起内および突起の基部の中胚葉細胞間にラミニンの沈着が検出されました(図4)。 これは、ラミニンα5、ナイドゲン2(基底膜の構成成分28、29)、およびLama530の受容体であるインテグリンα6の突出が蔓延する発現と並行しており、ラット胚における細胞外マトリックス成分の発現上昇に関する以前の報告と一致している。高血糖状態31. これらのデータは、突起の形成における細胞接着の変化または中胚葉細胞の遊走障害と関係しています。

突起の内部にはラミニンが堆積しています。

突起を特徴とする3つの異なる発生段階にある胚:E8.0、頭折期(a〜d)、尾部に開いた神経板のあるE8.5(e〜h)、および神経管を妨害する大きな突起のあるE9.5クロージャー (i–l)。 切片は、DNA ((a,e,i); 青、Hoechst 33342)、リン酸化ヒストン 3 ((b,f,j); PH3、緑)、およびラミニン ((c,g,k); 赤) で染色されました。 マージされたカラー画像をそれぞれ (d,h,l) に示します。 略語: ac、羊膜腔。 da、背側大動脈。 en、内胚葉。 ep、エピブラスト層。 hf、頭隠し。 うーん、後腸。 mw、中胚葉翼。 np、神経板。 p、突起。 それで、ソマトプレウラ。 spl、内臓胸膜。 初期段階から成熟段階までのすべての突起は、間葉内のラミニンの内部蓄積を特徴とします (黄色の三角形)。 さらに、細胞外層は通常、細胞外マトリックスのラミニン陽性層によって内部間葉から分離されています。

遊走障害の証拠は、中胚葉の遊走と分化を支援する条件下での外植片培養物(図5)から得られ、ビメンチン32の染色によって確認された(図5b、c)。 これらの培養物では、E7.5またはE8.5での糖尿病に曝露されたNOD胚の後部組織外植片からの伸長は、正常血糖NOD妊娠からの胚の外植片からの遊走と比較して有意に減少した(図6a)。 さらに、糖尿病に曝露された胚について、切除された突起の培養物と、E8.5で隣接する後部組織の外植片とを比較した。 突起からの細胞は、外植片から遊走できなかったか、または対応する後部組織外植片から観察された伸長と比較して遊走が著しく少なかった(緑色の枠内で比較:図5g、h、iからj、k、lおよび図5m) ,n,o から p,q,r まで、および図 6b)。 初期の胚からの細胞はこれらのアッセイで同等の遊走能力を示すため、突起から遠ざかる細胞の遊走の減少は発生の未熟に起因するものではありません(補足図3a)。 伸長の程度も開始時の外植片のサイズと相関していませんでした(補足図3b)。 したがって、我々は、母親の糖尿病への曝露が突起の中胚葉の遊走能力の障害の原因であると結論づけた。 最後に、糖尿病に曝露されたNOD E8.5胚からの外植片の伸長は、糖尿病に曝露されたFVB株のE8.5胚の外植片と比較して減少しました(図6c)。これは、NODモデルにおける突起の発生率が高いことを説明できる可能性がありますFVBと比較。

突起および後部胚組織の外植体培養。

外植片培養の画像。 固定した外植片を、ビメンチン(緑)、ファロイジン(赤)に対する抗体で染色してアクチンを検出し、DRAQ5(青)で細胞核の位置を特定しました。 培養条件は、正常な NOD 妊娠からの E7.5 胚の原条外植片におけるリズミカルな収縮中心の形成によって証明されるように、心臓中胚葉を含む中胚葉の移動と分化をサポートしました (補足情報のタイムラプスビデオ)。 挿入図は、クローズアップ画像に描かれている領域を識別します。 (a) 正常な E7.5 NOD 胚からの外植片には、リズミカルに収縮する筋細胞の領域 (オレンジ色の円) がありました。 (b) 染色後の同じ外植片、暗視野コントラスト。 (c) 挿入領域の拡大拡大。 ( d – f )糖尿病に曝露された E8.5 NOD 胚からの外植片。 (g – l、m – r)同じ胚からの後部組織と突起の対応する外植片は、緑色の枠でグループ化されています。 同じ胚からの後部組織とそれぞれ比較して、(g-i、m-o) の突出はほとんど成長を示しません (j-l、p-r)。

母親が糖尿病にさらされると、外植片培養における細胞遊走が減少します。

培養開始後6時間から26時間の間に各外植片の縁の細胞が移動した正味の外向き距離として外植片からの増殖を定量化する。 アスタリスクは、t 検定における統計的有意性を示します (p < 0.05)。 (a)糖尿病に曝露されたNOD胚(経験、オレンジ色)からの後部組織外植片は、E7.5の正常(n、白)妊娠からの外植片と比較して、伸長が大幅に減少しています(正常n = 10、曝露n = 7; p = 1.7 × 10−3; アルファ = 0.05 で 96.7% のパワー) および E8.5 (通常 n = 8、露出 n = 39; p = 6.7 × 10−4; アルファ = 0.05 で 99.7% のパワー)。 (b) E8 で、切除された突起の外植片 (赤) は、同じ胚からの対応する後部組織 (オレンジ) よりも著しく少ない伸長を生成しました (n = 12 ペア; p = 6.2 × 10−5; α = 0.05 で 99.9% 検出力) .5。 Y 軸のスケールの違いに注目してください。 (c)糖尿病に曝露されたE8.5 NOD胚からの後部組織外植片(オレンジ色、(a)と同じデータ、n = 39)は、糖尿病に曝露されたE8.5のFVB胚からの外植片(紫色、n = 39)と比較して伸長の減少を示します。 = 6; p = 4.4 × 10−7; アルファ = 0.05 での 100% 検出力)。

これらの結果はまた、ウシ胎児血清中に存在する支持細胞外マトリックスおよび成長因子を含む培養条件が、外植片の培養の26時間中の細胞遊走欠損を救済するには十分ではないことを実証している。 より低いグルコース濃度での培養は転帰に影響を及ぼさなかった(E7.5についてはp = 0.23、E8.5についてはp = 0.22)。 したがって、外植片培養は、母親の糖尿病への子宮内での曝露が細胞遊走の障害を引き起こし、最も重篤な影響を受けた個体では神経板からの突出を引き起こす原線条からの脱出を減少させるという我々の結論を裏付けるものである。

突起は、Cripto (Tdgf1)、Eomes、Fgf8、Fgfr1、Lrp5/Lrp6、Map4k4 (Nik)、Mesp1/Mesp2、Mixl1、Pten、Rac1、Ship2、T の機能喪失を伴う 20 の遺伝モデルでも報告されています。 、Talin および Tcf3 遺伝子 33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、または Axin2、Nckap1 (Nap1) における ENU 誘発変異)、Supt20(p38IP)およびUdgh遺伝子50、51、52、53(54でレビュー)。 中胚葉遊走の障害は、そのような細胞蓄積の機構的基盤として関与しており、Pten43およびRac145の胚盤葉上層特異的除去により、これらの遺伝子が中胚葉遊走の細胞自律的制御因子であることが同定された。 胚が発達の後期まで生存する 15 の突出変異体のうち、共通の転帰は神経管開放または二分脊椎 (6 モデル)、心臓発達欠陥 (9 モデル) および尾側成長欠陥 (9 モデル) です。 発現が廃止された機能喪失モデルとは対照的に、糖尿病に曝露された胚ではこれらすべての遺伝子の発現が検出され、Axin2、Fgf8、Mesp1、Mesp2、Mixl1、およびTが特に突起で蔓延していました(図2aおよび補足)表 2) は、我々の曝露モデルにおける遊走欠陥が中胚葉遺伝子発現の喪失によるものではないことを示しています。

興味深いことに、突起は原条全体に沿ってではなく、前後の離散的な位置に形成されました。 以前のデータ 55 と一致して、NOD 胚の NTD の 3 分の 2 (すべての胚の約 26%) が胚の幹領域に関与していることがわかりました。 この割合は、突起の発生率 25% に匹敵し、そのほとんどすべてが原条で覆われた領域に出現します。 FVB モデルでは、NTD の半分 (全胚の約 11%) に幹が関与しており (未発表の観察結果)、これも突起発生率 (12.9%) に匹敵します。 したがって、どちらの糖尿病モデルでも、マウスの糖尿病妊娠における体幹部および尾側の神経管欠損の大部分は、中胚葉の遊走欠陥が原因である可能性があります。 より前方の位置の突起は、たまにしか検出されませんでした (例、図 1F および挿入図)。 原始条領域内であっても、突起は独特の位置に限定されており、おそらく突起の形成に寄与する摂動の時間枠が限られていることを示している。

突起がどのようにして神経管欠損を引き起こすのかは 3 つの可能性があります: (i) 神経板の最初の屈曲に必要な内側ヒンジ点の形成を妨げることによるもの 56,57、(ii) 神経板の減少により将来の神経上皮の上昇と屈曲が損なわれることによるもの 57下にある中胚葉への細胞の移動、および(iii)背側正中線での神経管の閉鎖を物理的に妨害することによる。 これらの代替案は相互に排他的ではないため、さらなる調査が必要です。 突起のある胚の詳細な検査と組織学的分析(図7)により、突起の吻側で神経管が適切に閉鎖され、突起の尾側で神経形成不全が見られ、これらの場合、突起が神経管の閉鎖を物理的に妨げていたことが示されました。

神経管閉鎖に対する突起の影響。

(a) 妊娠 9.5 日の胚 (および拡大図)。神経管の背側屋根の下から出てくる突起があり、胚の尾端に向かう閉鎖を妨げています。 概略図と組織学的分析を補足図4に示します。(b) E9.5の胚で、ほぼ後肢の芽のレベルで長い突起が出現し、突起の尾側の神経板が開いています。 (c) E9.5 の胚。後肢の芽のレベルで神経管から伸びる分岐した突起 (ピンク色の三角形は突起の延長部分を指します) を特徴とし、神経管が出現点まで尾側に開いています。 概略図と組織学的分析を補足図4に示します。(d)前脳と中脳が閉じたE10.5の胚(側面図および背面図)ですが、中脳 - 後脳接合部の尾側で神経形成が失敗しました。 後脳と脊髄の接合部付近に小さな突起(黒い点描線)が見られます。 (e) 前肢芽のレベルに非常に小さな突起のある E10.5 の胚。 神経形成は、突起の小さな領域を除いて、神経軸に沿って正常に完了しました。 (f) 前肢芽のわずかに尾側に大きな突起を持つ E10.5 の胚 (白三角)。 神経管は突起の吻側では閉じていますが、尾側では突起から神経軸の端まで開いたままです(白塗りの三角形)。

この研究において、我々は、中胚葉移動障害が、NTD の病因の根底にある形態形成不全であることを特定した。 これらの NTD は環境危険因子である母体の代謝性疾患によって引き起こされるため、我々の発見は、中胚葉の移動が代謝状態の影響を受けやすいことを示唆しています。 食事が FVB モデルにおける NTD の割合を調節することを以前に実証したように、中胚葉の移動は母親の食事の組成にも反応するようです19。 NOD 系統では、上に示したように、STZ 誘発糖尿病マウスの妊娠における葉酸の有益な効果と同様に、葉酸の補給により NTD の発生率が減少します 58。 これらの発見は、代謝因子が中胚葉の形成と移動に影響を与える可能性があるという結論を裏付けるものであり、分子解析の結果と合わせて、神経管やその他の先天異常を予防するための新規の細胞標的および分子標的を特定することになります。

ヒトの糖尿病の妊娠における最も特徴的な先天奇形は、心臓欠陥、神経管欠陥、および尾側成長欠陥 7、8、9、10 であり、妊娠 7 週目以前に発生すると仮定されています 7。 私たちの結果は、原腸形成中の中胚葉移動の混乱が、これらの一見不均一な先天異常の共通の病因であるという命題を裏付けています 59,60: (i) ここで実証されているように、神経管欠損は中胚葉移動の障害の結果として発生します。 (ii) 初期の心臓前駆細胞は原始線条から発生し、そこから移動します 61,62。 (iii) 尾側の成長欠陥も、後部原条における中胚葉形成および移動の変化 63,64 と一致しています。 同様に、中胚葉欠損は、VACTERL65 の脊椎、心臓、腎臓、四肢の奇形や軸性中胚葉異形成 66 表現型の根底にあると考えられており、これらは母体の糖尿病と関連付けられています 67,68,69,70。 したがって、I型糖尿病の2つの異なるマウスモデルにおける原腸形成中の異常な中胚葉移動の我々の発見は、糖尿病性胎児症における最も一般的な構造異常の発生タイミングと形態形成的起源の両方を説明できる統一的な細胞機構を提供する。

すべての動物実験は、ペニントン生物医学研究センター IACUC の事前承認を得て、米国国立衛生研究所の「実験動物の管理と使用に関するガイド」に従って実施されました。 組織学的または分子分析のために、高血糖の NOD または FVB 母動物、および系統が一致した正常血糖の対照母動物から胚を妊娠 8.5 日目に調製しました。 奇形のある胚は固定され、DAPI で染色され、2 光子共焦点顕微鏡で画像化されました。 Imaris ソフトウェアを使用して、光学切片を使用して個々の胚の 3 次元再構成を生成しました。 突出組織の病因と正体を決定するために、AB SOLiD 5500XL シーケンサーで発現タグ配列決定による遺伝子発現プロファイリングを実行しました。 発現プロファイルを、突起組織と、神経管閉鎖部位 1 の直前のレーザー顕微解剖によって準備された開放神経板との間で比較しました。SOLiDSAGE を使用して配列リードをマッピングし (RefSeq RNA、mm9)、各遺伝子のカウント データを生成しました。 差次的な遺伝子発現は、DESeq を使用して決定され、qPCR によって選択された遺伝子が検証されました。 in situ ハイブリダイゼーションおよび免疫組織化学分析は、確立されたプロトコールに従って凍結切片に対して実行されました。 突起および後部胚組織における細胞の遊走能力を、微速度撮影ビデオおよび位相差顕微鏡を使用して、外植片培養において評価した。

アクセッションコード: SAGE の結果は、アクセッション番号 GSE53075 で Gene Expression Omnibus データベースに保管されています。

この記事を引用する方法: Salbaum、JM et al. 非肥満糖尿病(NOD)マウス系統における神経管閉鎖不全の新たな様式。 科学。 議員5、16917; 土井: 10.1038/srep16917 (2015)。

この論文の訂正が公開されました: https://doi.org/10.1038/s41598-022-09478-1

JB ウォーリングフォード、ルイジアナ州ニスワンダー、GM ショー & RH フィネル 神経管欠損を理解し、予防し、治療するという継続的な課題。 サイエンス 339、1222002、土井: 10.1126/science.1222002 (2013)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Copp、AJ、Stanier、P. & Greene、ND 神経管欠陥:最近の進歩、未解決の疑問と論争。 Lancet Neurol 12、799–810、土井: 10.1016/S1474-4422(13)70110-8 (2013)。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

Harris, MJ & Juriloff, DM 神経管閉鎖異常を有するマウス変異体のリストが更新され、神経管閉鎖の完全な遺伝的観点に向けて前進しました。 先天性欠損症 Res A Clin Mol Teratol 88、653–669、doi: 10.1002/bdra.20676 (2010)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Salbaum, JM & Kappen, C. 妊娠中の神経管欠損遺伝子と母親の糖尿病。 先天性欠損症 Res A Clin Mol Teratol 88、601–611、doi: 10.1002/bdra.20680 (2010)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

パンギリナン、F.ら。 神経管欠損の危険因子としての 82 個の候補遺伝子における一般的な遺伝的変異の評価。 BMC Med Genet 13、62、土井: 10.1186/1471-2350-13-62 (2012)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Smithells, RW、Sheppard, S. & Schorah, CJ ビタミン欠乏症と神経管欠損。 Arch Dis Child 51、944–950 (1976)。

論文 CAS PubMed Central PubMed Google Scholar

Mills, JL、Baker, L.、Goldman, AS 糖尿病の母親の乳児の奇形は、妊娠 7 週目より前に発生します。 治療への影響。 糖尿病 28、292–293 (1979)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Kucera, J. 糖尿病女性の子孫における先天異常の割合と種類。 J Reprod Med 7、73–82 (1971)。

MathSciNet CAS PubMed Google Scholar

Martinez-Frias, ML 糖尿病の母親の妊娠結果の疫学分析: 最も特徴的で最も頻度の高い先天異常の特定。 Am J Med Genet 51、108–113、doi: 10.1002/ajmg.1320510206 (1994)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

後藤議員およびゴールドマン AS 糖尿病性胎児症。 Curr Opin Pediatr 6、486–491 (1994)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

ウィリアムズ、LJ 他米国における葉酸強化の義務化への移行期における二分脊椎症と無脳症の有病率。 奇形学 66、33–39、土井: 10.1002/tera.10060 (2002)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

近藤 A.、上平 O.、小澤 H. 神経管欠損症: 有病率、病因および予防。 Int J Urol 16、49–57、土井: 10.1111/j.1442-2042.2008.02163.x (2009)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Leiter, EH マウスの糖尿病感受性の遺伝学。 Faseb J 3、2231–2241 (1989)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Leiter, EH 非肥満糖尿病マウスと糖尿病感受性の遺伝学。 Curr Diab Rep 5、141–148 (2005)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Otani, H.、Tanaka, O.、Tatekawa, R.、Naora, H. & 米山, T. NOD マウス胚における先天奇形の原因としての糖尿病環境と遺伝的素因。 糖尿病 40、1245–1250 (1991)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

森島 M.、安藤 M.、高尾 A. 心房部位に特に関連した NOD マウスの内臓心房異性神経症候群。 奇形学 44、91–100、土井: 10.1002/tera.1420440113 (1991)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

森島正、安井博、安藤正、中沢正、高尾明。マウスの内臓心房ヘテロタキシーの病因における遺伝的糖尿病と母親の糖尿病の影響。 奇形学 54、183–190、doi:10.1002/(SICI)1096-9926(199610)54:4<183::AID-TERA2>3.0.CO;2-2 (1996)。

3.0.CO;2-2" data-track-action="article reference" href="https://doi.org/10.1002%2F%28SICI%291096-9926%28199610%2954%3A4%3C183%3A%3AAID-TERA2%3E3.0.CO%3B2-2" aria-label="Article reference 17" data-doi="10.1002/(SICI)1096-9926(199610)54:43.0.CO;2-2">論文 CAS PubMed Google Scholar

Pavlinkova, G.、Salbaum, JM & Kappen, C. 母体の糖尿病は、発生中の胚の転写プログラムを変化させます。 BMC Genomics 10、274、土井: 10.1186/1471-2164-10-274 (2009)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kappen, C.、Kruger, C.、MacGowan, J.、Salbaum, JM 母親の食事は、糖尿病妊娠のマウスモデルにおける神経管欠損のリスクを調節します。 Reprod Toxicol 31、41–49、土井: 10.1016/j.reprotox.2010.09.002 (2011)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

ベック、S.ら。 胚外プロテアーゼは、原腸形成中の Nodal シグナル伝達を調節します。 Nat Cell Biol 4、981–985、土井: 10.1038/ncb890 (2002)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Ramkumar, N. & Anderson, KV スナップショット: マウスの原始線条。 セル 146、488–488 e482、doi: 10.1016/j.cell.2011.07.028 (2011)。

論文 PubMed Google Scholar

西山 明 ほか転写因子の系統的な誘導によるESCにおける遺伝子調節ネットワークの初期応答の解明。 Cell Stem Cell 5、420–433、doi: 10.1016/j.stem.2009.07.012 (2009)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

ネルソン、AC et al. 統合された機能ゲノミクスアプローチにより、脊索腫における短鎖 (T) によって指示される制御ネットワークが特定されます。 J Pathol 228、274–285、doi: 10.1002/path.4082 (2012)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

竹本 哲 ほか Tbx6依存性のSox2制御は、軸性幹細胞の神経または中胚葉の運命を決定します。 Nature 470、394–398、土井: 10.1038/nature09729 (2011)。

論文 ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Wilkinson, DG、Bhatt, S. & Herrmann, BG マウス T 遺伝子の発現パターンと中胚葉形成におけるその役割。 Nature 343、657–659、土井: 10.1038/343657a0 (1990)。

論文 ADS CAS PubMed Google Scholar

Chapman, DL、Agulnik, I.、Hancock, S.、Silver, LM & Papaioannou, VE Tbx6、原腸形成時の近軸中胚葉形成に関与するマウス T-Box 遺伝子。 Dev Biol 180、534–542、土井: 10.1006/dbio.1996.0326 (1996)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Wardle、FC および Papaioannou、VE 初期中胚葉の T-box ターゲットを明らかにする。 Curr Opin Genet Dev 18、418–425、doi: 10.1016/j.gde.2008.07.017 (2008)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

コップ、AJら。 マウス神経管発達中のラミニンアイソフォーム発現の地域差。 Matrix Biol 30、301–309、土井: 10.1016/j.matbio.2011.04.001 (2011)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Salmivirta, K. et al. マウス ナイドジェン 2 の基底膜成分および細胞への結合、および胚組織および成体組織におけるその発現は、2 つのナイドジェンの相補的機能を示唆しています。 Exp Cell Res 279、188–201 (2002)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Rebustini、IT et al. ラミニンα5は顎下腺上皮の形態形成に必要であり、β1インテグリンシグナル伝達を介してFGFR発現に影響を与えます。 Dev Biol 308、15–29、土井: 10.1016/j.ydbio.2007.04.031 (2007)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Cagliero, E.、Forsberg, H.、Sala, R.、Lorenzi, M. & Eriksson, UJ 母親の糖尿病は、ラット胚における細胞外マトリックス成分の発現増加を誘導します。 糖尿病 42、975–980 (1993)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Burdsal、CA、Damsky、CH、Pedersen、RA 哺乳類の原条における中胚葉の分化と移動における E-カドヘリンとインテグリンの役割。 開発 118、829–844 (1993)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Jin, JZ & Ding, J. Cripto は、マウスの原腸形成中に中胚葉と内胚葉の細胞を割り当てるために必要です。 Dev Biol 381、170–178、土井: 10.1016/j.ydbio.2013.05.029 (2013)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Arnold, SJ、Hofmann, UK、Bikoff, EK & Robertson, EJ マウスにおける軸形成、上皮から間葉への移行、および内胚葉の指定におけるエオメソデルミンの重要な役割。 Development 135、501–511、doi: 10.1242/dev.014357 (2008)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Sun, X.、Meyers, EN、Lewandoski, M. & Martin, GR Fgf8 の標的破壊は、原腸形成マウス胚における細胞遊走の失敗を引き起こす。 Genes Dev 13、1834–1846 (1999)。

論文 CAS PubMed Central PubMed Google Scholar

Guo, Q. & Li, JY マウス原腸形成前および原腸形成中の主要な Fgf8 スプライスフォーム、Fgf8b の独特な機能。 Development 134、2251–2260、doi: 10.1242/dev.004929 (2007)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

デン、CX 他。 マウス FGFR-1 は、移植後の初期の成長と軸方向の組織化に必要です。 Genes Dev 8、3045–3057 (1994)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Ciruna, BG、Schwartz, L.、Harpal, K.、yamaguchi, TP & Rossant, J. 線維芽細胞増殖因子受容体 1 (Fgfr1) 機能のキメラ解析: 原条を通る形態形成運動における FGFR1 の役割。 開発 124、2829–2841 (1997)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Kelly, OG、Pinson, KI & Skarnes, WC Wnt 共受容体 Lrp5 および Lrp6 は、マウスの原腸形成に必須です。 Development 131、2803–2815、doi: 10.1242/dev.01137 (2004)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Xue、Y.ら。 Ste20 NCK 相互作用キナーゼ (NIK) を欠くマウスの中胚葉パターン形成欠陥。 開発 128、1559–1572 (2001)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

北島 S.、高木 A.、井上 T. & 嵯峨 Y. MesP1 と MesP2 は心臓中胚葉の発達に不可欠です。 開発 127、3215–3226 (2000)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

ハート、AH et al. Mixl1 は、マウス胚における軸方向中内胚葉の形態形成とパターン形成に必要です。 開発 129、3597–3608 (2002)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Bloomekatz, J.、Grego-Bessa, J.、Migeotte, I. & Anderson, KV Pten は、マウス胚の前後軸の指定中の集合的な細胞移動を調節します。 Dev Biol 364、192–201、土井: 10.1016/j.ydbio.2012.02.005 (2012)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Migeotte, I.、Omelchenko, T.、Hall, A. & Anderson, KV Rac1 依存性の集合的細胞遊走は、マウスの前後体軸の特定に必要です。 PLoS Biol 8、e1000442、doi: 10.1371/journal.pbio.1000442 (2010)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Migeotte, I.、Grego-Bessa, J. & Anderson, KV Rac1 は、原腸形成マウス胚における細胞間シグナルに対する形態形成応答を媒介します。 Development 138、3011–3020、doi: 10.1242/dev.059766 (2011)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Saxton, TM & Pawson, T. 原腸形成時の形態形成運動には、SH2 チロシン ホスファターゼ Shp2 が必要です。 Proc Natl Acad Sci USA 96、3790–3795 (1999)。

論文 ADS CAS PubMed Central PubMed Google Scholar

Wilson, V.、Manson, L.、Skarnes, WC & Beddington, RS T 遺伝子は、原腸形成中の正常な中胚葉形態形成細胞の運動に必要です。 開発 121、877–886 (1995)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

モンクレー、SJ 他タリン遺伝子を破壊すると、原腸形成段階でマウスの発育が停止します。 Dev Dyn 219、560–574、doi: 10.1002/1097-0177(2000)9999:9999<::AID-DVDY1079>3.0.CO;2-Y (2000)。

3.0.CO;2-Y" data-track-action="article reference" href="https://doi.org/10.1002%2F1097-0177%282000%299999%3A9999%3C%3A%3AAID-DVDY1079%3E3.0.CO%3B2-Y" aria-label="Article reference 48" data-doi="10.1002/1097-0177(2000)9999:99993.0.CO;2-Y">論文 CAS PubMed Google Scholar

メリル、BJら。 Tcf3: 初期胚における軸誘導の転写調節因子。 Development 131、263–274、doi: 10.1242/dev.00935 (2004)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Qian, L.、Mahaffey, JP、Alcorn, HL & Anderson, KV マウス胚における Wnt シグナル伝達の阻害と活性化における Axin2 の組織特異的役割。 Proc Natl Acad Sci USA 108、8692–8697、doi: 10.1073/pnas.1100328108 (2011)。

論文 ADS PubMed PubMed Central Google Scholar

Rakeman、AS & Anderson、KV マウス胚における軸の指定と形態形成には、WAVE 媒介アクチン分岐の調節因子である Nap1 が必要です。 Development 133、3075–3083、doi: 10.1242/dev.02473 (2006)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

ゾーン、IEら。 p38 および p38 相互作用タンパク質は、マウス原腸形成時の E-カドヘリンの下方制御に重要です。 Cell 125、957–969、doi: 10.1016/j.cell.2006.03.048 (2006)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Garcia-Garcia、MJ および Anderson、KV マウスの原腸形成中の Fgf シグナル伝達におけるグリコサミノグリカンの本質的な役割。 セル 114、727–737 (2003)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Herion, NJ、Salbaum, JM & Kappen, C. 原始線条の交通渋滞: 先天異常における中胚葉移動欠陥の役割。 先天性欠損症 Res A Clin Mol Teratol 100、608–622、doi: 10.1002/bdra.23283 (2014)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Ando, S.、Otani, H.、Tanaka, O.、Moritake, K. 非肥満糖尿病 (NOD) マウス胚における神経管欠損の形態学的分析。 コング。 アノム。 31、23–32 (1991)。

記事 Google Scholar

Copp, AJ、Greene, ND & Murdoch, JN 哺乳類の神経形成の遺伝的基盤。 Nat Rev Genet 4、784–793、doi: 10.1038/nrg1181 (2003)。

論文 PubMed Google Scholar

Shum, AS & Copp, AJ 神経上皮の形態形成における地域的な違いは、マウスにおける脊髄神経形成の複数の機構を示唆しています。 Anat Embryol (Berl) 194、65–73 (1996)。

記事 CAS Google Scholar

大山和也ほか葉酸は、糖尿病マウスの子孫の先天奇形を予防します。 Endocr J 56、29–37 (2009)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Khoury, MJ、Cordero, JF、Greenberg, F.、James, LM & Erickson, JD VACTERL 関連の集団研究: その病因的不均一性の証拠。 小児科学 71、815–820 (1983)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Martinez-Frias, ML、Frias, JL & Opitz, JM 形態形成と発生場理論の誤り。 Am J Med Genet 76、291–296 (1998)。

3.0.CO;2-T" data-track-action="article reference" href="https://doi.org/10.1002%2F%28SICI%291096-8628%2819980401%2976%3A4%3C291%3A%3AAID-AJMG3%3E3.0.CO%3B2-T" aria-label="Article reference 60" data-doi="10.1002/(SICI)1096-8628(19980401)76:43.0.CO;2-T">論文 CAS PubMed Google Scholar

Garcia-Martinez, V. & Schoenwolf, GC 鳥類の胚における心血管系の原始線条起源。 Dev Biol 159、706–719、土井: 10.1006/dbio.1993.1276 (1993)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

ユッツィー、KE & カービー、ML どうしてあなたは心の中で? 心原性中胚葉の胚の起源。 Dev Dyn 223、307–320、文書: 10.1002/dvdy.10068 (2002)。

論文 PubMed Google Scholar

ボーリング、A.ら。 下部脊柱の無形成を伴う多局性異常。 Am J Med Genet 87、99–114 (1999)。

3.0.CO;2-Q" data-track-action="article reference" href="https://doi.org/10.1002%2F%28SICI%291096-8628%2819991119%2987%3A2%3C99%3A%3AAID-AJMG1%3E3.0.CO%3B2-Q" aria-label="Article reference 63" data-doi="10.1002/(SICI)1096-8628(19991119)87:23.0.CO;2-Q">論文 CAS PubMed Google Scholar

アラバマ州ルージュモントら。 尾部発育不全、サイレノメリアおよび全座位逆性: 胚盤形成における原始的な欠陥。 Am J Med Genet A 146A、1470 ~ 1476 年。

論文 PubMed Google Scholar

ソロモン、BD VACTERL/VATER 協会。 Orphanet J Rare Dis 6、56、doi: 10.1186/1750-1172-6-56 (2011)。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

Russell, LJ、Weaver, DD & Bull, MJ 軸方向中胚葉異形成スペクトル。 小児科学 67、176–182 (1981)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Loffredo, CA、Wilson, PD & Ferencz, C. 母親の糖尿病:主要な心血管奇形の独立した危険因子であり、罹患した乳児の死亡率が増加します。 奇形学 64、98–106、土井: 10.1002/tera.1051 (2001)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Stevenson, RE & Hunter, AG VACTERL 関連の胚病因を考察。 Mol Syndromel 4、7–15、土井: 10.1159/000346192 (2013)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Depraetere, M.、Dehauwere, R.、Marien, P. & Fryns, JP 糖尿病の母親の乳児における重度の軸性中胚葉異形成スペクトル。 Genet Couns 6、303–307 (1995)。

CAS PubMed Google Scholar

Dinleyici、EC et al. インスリン依存性糖尿病の母親の乳児における複雑な心臓欠陥に関連する軸性中胚葉異形成スペクトルの重度の致死的経過。 Am J Med Genet A 143A、2156–2159、doi: 10.1002/ajmg.a.31895 (2007)。

論文 PubMed Google Scholar

リファレンスをダウンロードする

DNA 配列決定はペニントン生物医学研究センターのゲノミクス コア施設で行われ、共焦点顕微鏡検査、リアルタイム イメージング、レーザー キャプチャ マイクロダイセクションは細胞生物学およびバイオイメージング コア施設で行われました。 両中核施設は、PBRC 栄養・肥満研究センター (NORC NIH-P30DK072476) と PBRC 生物医学研究卓越センター (COBRE NIH-P20GM103528) によってサポートされています。 Richard Carmouche、Susan Newman、Diana Holmes の専門家による技術支援に感謝いたします。 このプロジェクトは、NIH 補助金 R01-HD085017 および R01-HD055528 (補足 HD055528-03S1 (JMS へ) を含む) および R01-HD37804 (補足 HD37804-S2 (CK へ) を含む) を通じて資金提供されました。

遺伝子発現制御部門、ペニントン生物医学研究センター、6400 Perkins Road、Baton Rouge、70808、LA、米国

J・マイケル・サルバウム & ジャカリン・マクゴーワン

ペニントン生物医学研究センター発生生物学部、6400 Perkins Road、Baton Rouge、70808、LA、米国

クラウディア・クルーガー、ニルス・J・ヘリオン、クラウディア・カッペン

ペニントン生物医学研究センター細胞生物学およびバイオイメージング中核施設、6400 Perkins Road、Baton Rouge、70808、LA、米国

デヴィッド・バーク

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

JMS と JM は胚の解剖を実施し、JM はレーザー解剖を実施しました。 NHの支援を受けて、RNAを調製し、SAGEライブラリを作製し、RT-PCRおよびin situハイブリダイゼーションおよび組織学的染色実験を実施した。 DB は共焦点イメージングと再構成を実行し、JMS は SAGE 分析と外植片培養を実行し、これらは CK によって定量化されました。 CK と JMS は実験を設計し、プロジェクトを調整し、バイオインフォマティクス分析を実行し、原稿を執筆しました。

著者らは、競合する経済的利害関係を宣言していません。

この作品は、クリエイティブ コモンズ表示 4.0 国際ライセンスに基づいてライセンスされています。 この記事内の画像またはその他のサードパーティ素材は、クレジットラインに別段の記載がない限り、記事のクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれています。 素材がクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれていない場合、ユーザーは素材を複製するためにライセンス所有者から許可を得る必要があります。 このライセンスのコピーを表示するには、http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ にアクセスしてください。

転載と許可

Salbaum, J.、Kruger, C.、MacGowan, J. 他非肥満糖尿病(NOD)マウス系統における神経管閉鎖不全の新たな様式。 Sci Rep 5、16917 (2015)。 https://doi.org/10.1038/srep16917

引用をダウンロード

受信日: 2015 年 7 月 13 日

受理日: 2015 年 10 月 21 日

公開日: 2015 年 11 月 23 日

DOI: https://doi.org/10.1038/srep16917

次のリンクを共有すると、誰でもこのコンテンツを読むことができます。

申し訳ございませんが、現在この記事の共有リンクは利用できません。

Springer Nature SharedIt コンテンツ共有イニシアチブによって提供

科学レポート (2021)

ネイチャーコミュニケーションズ (2017)

科学レポート (2016)

コメントを送信すると、利用規約とコミュニティ ガイドラインに従うことに同意したことになります。 虐待的なもの、または当社の規約やガイドラインに準拠していないものを見つけた場合は、不適切としてフラグを立ててください。